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QF-PCR技术在国外已有较广泛的应用,但目前尚未在国内产前诊断临床中普遍开展。为规范使用QF-PCR技术,由国家卫生和计划生育委i员会召集、中国医学科学院北京协和医院产前诊断中心主办的"全国产前筛查与诊断技术管理规范编制研讨会"于2015年11月14日在成都召开,会议就QF-PCR等快速产前诊断技术的临床应用进展及其在国内应用中存在的具体问题进行了深入而广泛的探讨,荧光定量PCR经销,并形成了QF-PCR技术在产前诊断中的应用专家共识。
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荧光定量PCRZui早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(PerkinElmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,博日荧光定量PCR,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
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相对常规PCR而言,荧光定量PCR的主要优点是准确地确定初始模板拷贝数和宽的动态范围内和高的灵敏度。荧光定量PCR结果可以用于定性(判断一段序列的有无),也可以用于定量(确定DNA拷贝数),即qPCR,而常规PCR只能做半定量。荧光定量PCR的结果无需通过琼脂糖凝胶电泳来评估,大大节省实验时间,提高实验效率。还有,由于PCR反应和检测都在反应管中进行,样品污染的几率大大降低,食品加工企业荧光定量PCR,无需扩增后的实验操作。
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简单的讲PCR技术Zui早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克i隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对或绝i对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病i人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。
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猪流行性腹泻病毒和非洲猪瘟病毒都具有在猪源原料中存活的能力;作用机制目前尚不清楚。根据应对流行性腹泻病毒的经验,在不影响动物性能和饲料成本的情况下,替换原料的可行性使得很多生产者不再使用猪源原料。研究表明热工过程可以杀灭病毒(如流行性腹泻病毒),但这只能作为紧急缓解措施,因为这要求产品在干燥和运输过程中必须不存在交叉污染。如果生产者认可排除猪源原料是可行的,那么还应该考虑到那些间接的猪源原料,像添加剂、基础混合物和那些可能源于猪源的动物蛋白或脂肪等。
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养猪场(户)真正了解所使用的饲料原料的供应链非常重要。包括:从谁那里购买了原料?他们又从哪里买到?在运输中是否与其他原料混杂或混合?每个中转地点的生物安全政策是什么?这些对于正确评估原料携带外来动物疾病的风险非常重要。饲料厂要注重生物安全。在不使用时盖住接收坑,有效地控制害虫,防止灰尘收集系统中的灰尘再循环回到饲料中,并管理好整个工厂的人员移动。Zui后,养猪场和饲料厂要考虑监测环境,以实现生物安全合规性。环境监测在人类食品和宠物食品行业已经成为常规举措,可以帮助人们发现生物安全计划中的薄弱环节。
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