维生素B2检测 核黄素检测 中国药典方法
维生素B2又名核黄素、乳黄素,作用名为促进生长因素。它是橙黄色针状结晶,熔点为282℃的,耐热,对空气、氧气稳定,微溶于水。其水溶液呈黄绿色荧光,在强酸性和碱性溶液中则充分溶解。在酸性溶液中加热也很稳定,而在碱性溶液中则不稳定,特别是具有遇光易分解的性质。维生素B 2在自然界中较多地存在于酵母、肝脏、蛋、牛乳、肉类中,在天然物中维生素B2不仅有游离型,还有与核酸结合在一起的。测定时要经适当的前处理,使其分离后进行测定。维生素B2的测定方法有分光光度法**、核黄素荧光法和光黄素荧光法【2,3,4,5,8,9】等
随着仪器分析技术的发展,液相色谱法也应用于测定维生素B1和维生素B2,下面就此方法进行介绍。
方法原理
样品在稀盐酸溶液中经消化,用淀粉酶和木瓜酶分解样液中的淀粉和蛋白质后,即得到维生素B2的测定样液。此溶液在碱性铁***溶液中氧化后用异丁醇提取所得维生素B2测定样液。用YWG-C18 柱乙腈-磷酸盐缓冲溶液作流动相,以荧光检测器进行液相色谱法测定,求出样品中维生素B1和维生素B2的含量。
仪器
(1)液相色谱仪。具有∶①荧光分光检测器和记录仪;②色谱柱∶不锈钢柱长为250mm,内径3.8mm。淤浆法填装YWG-C18H3710μ固定。
(2)微量注射器。5μL和10μL。
试剂
(1)乙腈和异丙醇(分析纯)。重蒸。
(2)0.025mol·L-'磷酸盐缓冲液(pH=7.4)。
(3)流动相。流动相A,以磷酸盐缓冲液80份和乙腈20份相混而成;流动相B,以磷酸盐缓冲液82份和乙腈18份混合而成。
(4)碱性铁***溶液。吸取150g·L-|氢氧化钠溶液97mL加入10g·L-1铁***3mL混合而成。
(5)混合酶溶液。取淀粉酶和木瓜酶各3g,用2mol·L-'醋酸钠溶液稀释至100mL。
(6)维生素B1,标准溶液。用0.01mol·L'盐酸溶液将符合药典的盐酸硫胺素配制成100mg·L-I的标准溶液。
(7)维生素B2标准溶液。用0.01mol·L~1盐酸溶液将符合药典的核黄素配制成25mgL-1的标准溶液。
(8)维生素B1和维生素B2混合工作液。取上述维生素B1和维生素B2标准溶液用0.01mol·L 盐酸溶液稀释至含维生素B1和维生素B2各2mg·L-1 的标准溶液。