1、菌落总数定义和卫生学意义
定义:指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每 g (每mL)检样所生长出来的菌落数。
卫生学意义:菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
2、GB4789.2-2022菌落总数测定(平板法)
操作注意事项
从样品的均质到倾注琼脂,应在15分钟内完成。
检验所有物品需无菌和无残留的抑菌物质。
建议用磷酸盐缓冲液作为稀释液,因为磷酸盐缓冲液能更好地调节食品样品中pH变化,对细菌具有保护作用。
对易产生较大颗粒的样品(如肉类)进行检测时,建议使用带滤网均质袋,以便均质后用吸管吸取匀液。
高压灭菌后,培养基的琼脂会分层在底部,应摇匀后使用。
当样品中含有吸水性物质(如淀fen、面fen等),应以快速度进行琼脂倾注。
在培养箱中倒置培养,为防止中间平皿过热,堆叠高度建议不超过5个平皿。
结果计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。
选取菌落数在30 CFU~300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为“多不可计”。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
结果计算
若只有一个稀释度平板上的菌落数在30 CFU~300 CFU之间,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL) 样品中菌落总数结果。
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度zui高的平板进行计数,其他平板可记录为“多不可计”,结果按平均菌落数乘以zui高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU,则应按稀释度zui低的平均菌落数乘以稀释倍数算。
若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以zui低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU~300 CFU之间,其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时,则以zui接近30CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按下式计算:
结果报告
菌落数小于100 CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。
表1-1:菌落总数结果计算与报告方式实例