茶叶中可可碱检测 咖啡碱含量检测

茶叶中可可碱检测 咖啡碱含量检测   

在茶叶化学成分中对于咖啡碱的研究比较早，在分析技术方面的研究也在逐步提高。60年代前，-直采用重量法和碘量法。70年代，主要采用比色法和紫外分光光度法，并开始应用气相色谱法。进入80年代后高效液相色谱法也开始用于分析测定茶叶中的咖啡碱。本文研究了高效液相色谱(HPLC)分离测定茶叶中咖啡碱、茶碱、可可碱的条件和测定方法。

实验方法：

(一)试剂与仪器

1. 试剂:茶碱、可可碱为馈赠品,咖啡碱按升华方法叫自制(色谱纯),其它为国产分析纯试剂，水为三重蒸馏水。咖啡碱、茶碱、可可碱分别溶于水中，贮存液I浓度为咖啡碱2mg/ml,茶碱、可可碱1mg/ml,存放于冰箱中，上述溶液稀释10倍为贮存液I。贮存液I各取-一定量混合后再稀释为标准液，标样浓度分别为咖啡碱0.1ug/ul,茶碱 ug/ul,可可碱0.02ug/ul;探讨分离条件时以(士)儿茶素(瑞士产)为内标，贮存液浓度为2mg/ml,存放于冰箱中。取等量内标贮存液加入到嘌呤碱标准溶液和试液中，内标浓度为0.02ug/ul。每日配制1次，每次进样10ul。

2. 2.仪器: M 510泵，M 680自动梯度控制仪，U6K 通用进样器，490型 超高感多功能检测器, M730数据处理记录仪(Waters)。

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4. (二).实验流程

5. 1.样品的提取和净化

6. 方法I:jingque称取1 g左右(准确到0.0002 g )待测千茶样(过40目筛)于100 ml锥形瓶中，加1g重质氧化镁和80 ml沸水，

7. 在沸水浴上加热30分钟，趁热过滤，残渣用沸水洗3次,滤液一并收集于100ml容量瓶中，冷至室温定容至刻度。取出部分提取液经0.45um滤膜过滤后，即为待测试液。

8. 方法I:jingque称取1 g左右(准确到0.0002 g )待测千茶样于100m1锥形瓶中,加80.ml沸水，在沸水浴上加热30分钟，趁热过滤，残渣用沸水洗3次，滤液一并收集于100ml容量瓶中,冷至室温定容至刻度。

9. 取5.00ml提取液通过经乙腈处理过的SEP-PAKS Ci8小预柱,用3ml水洗小预柱后，再用7ml三氯甲烷洗脱,收集全部氯仿洗脱液，浓缩至千，用5.00ml高纯水溶解供HPLC分析。.

10. 每次进样10 μul。

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12. 2.HPLC条件

13. 见图1和图2。

14. 根据tp定性，外标或内标法定量。

15. 色谱柱:①PADIAL-PAK μ BONDAPAK Ci8 10 um 8X 100 mm反相柱;②MICROμBONDAPAK C1a 8-10 μm 3.9 x 300 mm

16. 反相柱。

17. 用于①柱的流动相为经0.5um滤膜过滤甲醇与经0.45um滤膜过滤纯水的混合液。

18. 用于②柱的流动相，N-二甲基 甲酰胺、甲醇、冰醋酸(20: 1 :0.5v/v)溶液经0.5 um滤膜过滤并脱气和经0.45μm滤膜过滤并脱气之水的混合液。