原代心肌细胞培养是体外研究心血管疾病相关机制的主要手段和基本技术。基础实验中,与细胞系相比,原代心肌细胞的形态及电生理方面更接近在体细胞,培养原代心肌细胞的质量直接关系实验的进程及结果。
倒置相差显微镜
心肌细胞质量评价
1)心肌细胞观察
倒置显微镜观察细胞形态、生长状态、搏动频率、节律、强度,观察培养液色泽变化以判断心肌细胞生长是否良好。
2)台盼蓝拒染法计算细胞活力及细胞纯度的鉴定
心肌细胞悬液用等量体积分数为0.4%台盼蓝溶液混匀后用血细胞计数板分别计数活细胞和死细胞数。镜下死细胞染成蓝色,活细胞拒染而呈透亮状态。
细胞存活率=活细胞数/总细胞数(活细胞+死细胞)×100.%。
用免疫荧光法或通过细胞种板72h后计数搏动心肌细胞百分数测定心肌细胞纯度。
倒置显微镜NIB910特点:
NIS 无限远光学系统
目镜·SW10X/22 ·SW10X/25 ·EW12.5X/17.5 ·WF15X/16 ·WF20X/12
物镜·N-iPLFN PH 平场半复消色差相差物镜 4X、10X、20 X、40X、60X
·N-iPLFN 平场半复消色差物镜 10X、20 X、40X、60X
观察方式:明场、相衬、DIC、暗场、荧光
▲明场观察
独有 NIS无限远光学系统,结合半复消色差荧光物镜有效地消去场曲、色差、球差、彗差等成像问题,图像更明亮,所有倍率都能获得更高超分辨率和平坦型。
▲相差观察
相衬是一种光学反差技术,采用相衬物镜和聚光环。高效率卤素灯能够为系统提供明亮光源,在高倍率下亦能获得清晰的图像。
▲微分干涉(DIC)
微分干涉是一种极具性价比的光学技术,不需要价格高昂的光学器件。浮雕反差仅使用明视场物镜和两个相衬调节滑块;对于较厚的样本,例如诱导多能干细胞,微分干涉可提供伪三维无眩光图像,而使用传统的相衬观察方式通常会出现光晕。微分干涉可使用玻璃培养皿,是一种适用性非常强的观察技术。
▲荧光观察
采用zui新的高ji次波纹消除镀膜技术,使荧光的透过率更高、截止更敏锐、检测效率更高。高灵敏度的荧光能够获得明亮而高反差的成像效果。领xian的镀膜技术也减少散射光和自发荧光,确保更高的性噪比。