粗蛋白
粗蛋白的测定一般采用GB/T6432-2018《饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法》。
(1)样品的粉碎粒度:要求粉碎后全部通过0.42mm标准筛。样品粒度会对分析时间和测量效果产生影响,需要根据不同的样品物理性质及蛋白质含量对样品进行粉碎,过筛;
(2)合适的称样量:根据待测样品中粗蛋白含量的高低,预估标准溶液的使用量,保证滴定体积在10mL以上,一般鱼粉、肉粉、羽毛粉、玉米蛋类饲料原料称样量为0.25g左右,豆粕、棉粕、浓缩饲料称样量为0.40g左右,配合饲料称样量为0.50g左右,玉米、次粉类样品称样量为0.80g左右,一般样品加入6.4g混合催化剂和12mL即可,称样量大的样品在消解时可适当补加3~5mL。研究表明,消化过程中催化剂的性质和用量对终结果有显著影响;
(3)消解温度和时间一般控制在420°C、4h左右。当消解液为澄清的蓝绿色时,代表消解完全;如消解液为浑浊状,则消解不完全,可能的原因有消解温度偏低、消解时间不够等,需提高消解温度或延长消解时间;
(4)消解过程控制:为防止爆沸导致消化液沾壁、消解不彻底,消解温度应逐渐升高;若样品水分含量较高,钟消解会发生暴沸,可以选择程序升温,180°C维持30min,270°C维持30min,420°C维持2~3h;
(5)高肪或高糖类样品在消解时应注意防止产生大量泡沫,该类样品称完样后可在消解液中浸泡2h后再进行消解;
(6)蒸馏装置要保持良好的气密性,防止漏气,使用前用铵(99.9%)进行检查,要求铵含氮量在21.19%+0.20%;
(7)消化炉的消解孔不能有空位置,可以用空白消化管加补位;
(8)定期检查各消解孔温度的均匀性,温度偏低的孔会造成消解不完全,结果偏低。可用各孔消解测定同一饲料,结果与平均结果的精密度超出国标要求范围的孔标记不用;
(9)标准滴定溶液浓度一般控制在0.1mol/L+5%范围内(具体请参照GB/T601-2016<化学试剂标准滴定溶液的制备》);在滴定时,标准滴定溶液浓度过低会消耗过多的滴定液,造成试剂浪费,浓度过高则消耗的滴定液过少,导致较大的系统误差。配制标准溶液时,需要标定后使用;
(10)混合指示液不可存放时间过长,否则乙醇挥发会导致指示终点颜色发生变化,储存时应注意室温避光、密封保存,有效期为3个月。经验表明,夏季2周、冬季4周内使用效果;
(11)硼吸收液尽量现用现配,储存时间不宜过长,全自动程序使用时室温可保存1个月,否则硼氨分解挥发,导致结果偏低;
(12)要保证蒸馏过程中的碱性环境,加碱要过量,一般是加入量的4倍,如在蒸馏过程中加碱后消解液的颜色没有变黑,要立即停止蒸馏,并补加氢氧化钠溶液至消解液变黑;
(13)蒸馏过程中长时间使用高浓度氢氧化钠溶液,管路内部会形成固体结晶,造成管路尔从而减少加碱量,甚至无法加碱。因此应定期将氢氧化钠溶液换成温蒸馏水对管路进行清洗;
(14)使用蔗糖代替样品进行空白测定,空白试验应符合标准要求,如果滴定体积过大,应检查试剂质量;
(15)通过有证标准物质或质控样品来验证结果的准确性。